1、具體來(lái)說(shuō)，溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響是不可忽視的在DNA提取過(guò)程中，溫度的微小變化都可能導(dǎo)致最終結(jié)果的偏差因此，在進(jìn)行分光光度計(jì)測(cè)量時(shí)，確保樣品和儀器都處于室溫是非常關(guān)鍵的此外，空白對(duì)照的準(zhǔn)確性也至關(guān)重要，任何微小的污染或者比色皿的問(wèn)題都可能影響到測(cè)量結(jié)果除了溫度和空白對(duì)照的問(wèn)題，還；在PCR擴(kuò)增之后，評(píng)估DNA質(zhì)量的方法多種多樣其中，直接測(cè)量DNA濃度是一種常用手段此外，還可以通過(guò)計(jì)算起始拷貝數(shù)與分子量的乘積乘以2的n次方n代表擴(kuò)增效率來(lái)間接評(píng)估DNA質(zhì)量這種方法雖然間接，但能夠提供重要的參考信息直接測(cè)DNA濃度通常借助分光光度計(jì)等儀器進(jìn)行這種方法快速且準(zhǔn)確，能夠直接；現(xiàn)在很多酶標(biāo)儀會(huì)配專(zhuān)門(mén)的核酸檢測(cè)板，上面有10幾個(gè)石英的光路系統(tǒng)，只要將2ul，甚至更少的樣品點(diǎn)到石英材料上，就可以一次測(cè)10幾個(gè)樣了不過(guò)板子比較貴如果沒(méi)有配特制的板，最好要找一些微量的96孔板例如半孔板，要求上樣量少，把DNA稀釋一定比例后加到酶標(biāo)板每一個(gè)孔中要保證最低加樣。

2、首先，分光光度計(jì)測(cè)量的樣品必須是均一的，搖勻后再測(cè)量結(jié)果會(huì)準(zhǔn)確些它是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器核酸的定量是分光光度計(jì)使用頻率最高的功能可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈雙鏈DNA，以及RNA核酸的最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算；使用紫外分光光度法檢測(cè)核酸濃度時(shí)，通常要求核酸溶液的濃度大于025μgml對(duì)于濃度更低的樣品，則推薦使用熒光分光光度法實(shí)驗(yàn)中，首先需使用分光光度計(jì)在260納米和280納米波長(zhǎng)下校準(zhǔn)儀器，然后取2μl質(zhì)粒DNA樣品，用水稀釋100倍，放入分光光度計(jì)的石英比色杯中讀取OD值根據(jù)OD260值計(jì)算DNA濃度；例如Qubit？dsDNA分析試劑盒這些試劑盒基于熒光染料與DNA結(jié)合的原理，通過(guò)讀取熒光信號(hào)強(qiáng)度來(lái)測(cè)量DNA濃度DNA濃度是指DNA溶液中DNA分子的相對(duì)濃度或數(shù)量的度量它表示在一定體積的DNA溶液中所含的DNA分子的多少用濃度單位為ngμL納克微升或μgmL微克毫升來(lái)表示。

3、使用OD260OD230進(jìn)行DNA濃度測(cè)量時(shí)，需要注意幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)首先，OD260主要用于測(cè)量DNA中的堿基對(duì)，尤其是A和T之間的雙螺旋結(jié)構(gòu)而OD230則更傾向于測(cè)量RNA中的核苷酸因此，在進(jìn)行DNA濃度測(cè)量時(shí)，確保使用的是OD260值其次，該方法基于的是DNA在紫外光譜中特定波長(zhǎng)下的吸收特性具體來(lái)說(shuō)，DNA在260。

4、在進(jìn)行rtpcr時(shí)，對(duì)于rna的濃度和純度要求，通常濃度在20ngul以上即可滿足實(shí)驗(yàn)需求如果樣本來(lái)源于組織，其濃度可能會(huì)非常高，達(dá)到幾百甚至幾千然而，對(duì)于病毒或少量細(xì)胞，所需的濃度會(huì)相對(duì)較低為了確保rna的純度，必須使用儀器進(jìn)行測(cè)量260280的理論值應(yīng)為20以上，而260230的值若達(dá)到12以上。